Pembelajaran Biologi di SMP/MTs masih menghadapi kendala, yaitu terbatasnya ketersediaan bahan ajar berupa penuntun praktikum yang sesuai dengan kebutuhan peserta didik dan model pembelajaran yang mendorong kerja sama. Kondisi ini menyebabkan kegiatan praktikum kurang optimal dalam menumbuhkan keterampilan kolaboratif dan pemahaman konsep siswa. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan penuntun praktikum Biologi berbasis model Collaborative Teamwork Learning (CTL) untuk siswa kelas VIII SMP/MTs yang valid dan praktis digunakan dalam pembelajaran. Penelitian ini menggunakan metode penelitian dan pengembangan (Research and Development) dengan model 4D yang meliputi tahap pendefinisian (define), perancangan (design), pengembangan (develop), dan penyebaran (disseminate). Penelitian ini dilakukan didua sekolah yaitu SMPN 17 Muaro Jambi dan MTsN 8 Muaro Jambi. Produk didesain dengan menggunakan Microsof word 2019 dan dibantu dengan penambahan elemen dari aplikasi Canva pada personal laptops. Validasi produk dinilai dari tiga aspek yaitu aspek bahasa dengan persentase 82,5% (valid), aspek materi dengan persentase 75% (valid) dan aspek desain dengan persentase 87,5% (sangat valid). Kepraktiksan produk dinilai melalui respon guru dan peserta didik. Persentase praktikalitas menurut guru di SMP sebesar 97,5% (sangat praktis) dan di MTs sebesar 97,5% (sangat praktis). sedangkan persentase menurut peserta didik dalam uji coba kelompok kecil di SMP sebesar 75,75% (praktis) dan di MTs sebesar 75,66% (praktis). Sedangkan dalam uji coba kelompok besar di SMP sebesar 94,73% (sangat praktis) dan di MTs sebesar 90,83% (sangat praktis). Berdasarkan data tersebut dapat disimpulkan pengembangan penuntun praktikum Biologi berbasis model Collaborative Teamwork Learning (CTL) untuk siswa kelas VIII SMP/MTs dinyatakan valid dan sangat praktis untuk digunakan dalam proses pembelajaran Biologi.